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顯微成像平臺

生物透射電鏡(生物TEM)

儀器型號

Hitachi Regulus8100,Sigma 300;Zeiss Gemini 300; Hitachi S4800;JSM-7800F;蔡司 Supra 55等

預(yù)約次數(shù):20369
新客專享:首單立減200元
測試收費:溝通
詳細介紹
 
項目介紹
 
生物透射電鏡是觀察生物細胞樣品內(nèi)部形態(tài)的重要工具,其電壓在80-120kv可以降低生物樣品因高能電子束輻射而損傷的影響,同時依賴于生物樣品制備技術(shù)的發(fā)展,如超薄切片技術(shù)、負染色技術(shù)、冷凍制樣技術(shù)、細胞化學(xué)技術(shù)等,廣泛應(yīng)用于組織學(xué)、細胞學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)及材料學(xué)等多個學(xué)科的研究中。一般用來觀察細胞整體結(jié)構(gòu)、細胞膜、細胞壁、細胞器等亞顯微結(jié)構(gòu)變化、材料進入細胞內(nèi)部的分布情況或者細胞應(yīng)付外界刺激產(chǎn)生的自噬小體等結(jié)構(gòu),以及外界生物入侵的侵染結(jié)構(gòu)等。
 
樣本要求
 
1. 送樣要求
(1)細胞樣品用1.5ml的尖底管,離心成團(至少黃豆大小),加入2.5%戊二醛固定液(緩慢加入電鏡固定液,不要將細胞吹散。若將細胞吹散,請離心3000轉(zhuǎn),保持細胞成團狀)。固定液加滿離心管,使樣品完全浸沒在固定液中,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結(jié)冰。 (細菌樣品要求同細胞)
(2)組織樣本:腸、血管、皮膚、肌肉等有方向性樣本需切成1mm*3mm*0.5mm長方體小塊(如下圖B),要觀察的面為橫切面(1mm*0.5mm),使用2mL離心管加滿2.5%戊二醛固定液;無方向性的組織,如肝臟、腎臟、肺臟等可切成1mm3立方體小塊(如下圖A),使用2mL離心管加滿2.5%戊二醛固定液,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸。注意:樣本管與冰袋隔開,避免固定液結(jié)冰。固定液滲透能力有限,超出此范圍后組織會無法完全固定,后續(xù)實驗無法完成,請務(wù)必重視此過程。 特別注意:取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
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(3)植物樣本:取材流程:PBS沖洗樣品,確保無泥沙等污染物。然后用鋒利刀片或剪刀將樣品切成合適大小,裝入預(yù)冷的植物及細菌電鏡專用2.5%戊二醛中。不需要定位的樣品切成1立方毫米大?。ㄈ缛~片、果實、花粉等),需要定位的樣品,切1mm×3mm×0.5mm的長條狀(莖、根、表皮等)隨后抽氣,讓組織能沉淀到管底。充分固定后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結(jié)冰。
(4)打印填寫完整的實驗預(yù)約單和樣品一起寄送;
(5)無法承接磁性樣本,敬請諒解。
2.測試周期 一般為樣品接收后的2-3周左右,如遇法定假期需要順延,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
3.交付數(shù)據(jù) 每樣提供10張拍攝圖片(不提供分析服務(wù))。如需更多照片請?zhí)崆芭c工作人員溝通確認,并且會產(chǎn)生額外費用,請悉知!結(jié)果反饋請在測試完成一周內(nèi),不建議回收樣品,可回收制備好的包埋快和銅網(wǎng),如有需要請?zhí)崆胺答伣oe測試工作人員。
 
結(jié)果展示
 
參考圖
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常見問題
 
question
1、植物的根部為什么有時看不到細胞核?
植物細胞的細胞核相對比較小,不好切,切片的時候有可能沒有切到,所以在觀察透射電鏡的時候會發(fā)現(xiàn)看不到細胞核。
question
2、2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液                 10ml
0.1mol/L二甲砷酸鈉                    50ml
蒸餾水加至                                  100ml
question
3、切片染色的目的是什么?
 由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等輕元素組成。這些元素原子對電子的散射能力很弱,相互之間的差別也很小。尤其生物超薄切片被樹脂所包埋,這些包埋樹脂對電子的散射能力與樣品本身差別很小。因此生物樣品超薄切片觀察時像的反差極弱。為了提高圖像的反差,要對超薄切片進行電子染色。這里所謂電子染色是根本不同于光學(xué)顯微鏡的染色,它是利用重金屬鹽(如鉛鹽、鈾鹽等)與細胞的某些成分或結(jié)構(gòu)結(jié)合,由于重金屬對電子散射能力很強,使那些與其結(jié)合的結(jié)構(gòu)或成分對電子散射能力增強,從而達到提高樣品本身反差。目前常用的染色劑是醋酸鈾和檸檬酸鉛染色液。
question
4、負染色背景雜亂可能是什么原因?qū)е碌?/div>
樣品中有其它的雜質(zhì)(如雜蛋白,酶,糖,甚至前期處理留下的鹽(PPS))都有可能造成背景比較臟亂,或染液在干燥時分布不均勻?qū)е拢@些都是在負染時的正?,F(xiàn)象。
question
5、負染色的樣本用哪種染料比較好?
磷鎢酸對病毒的染色效果比較好;醋酸鈾(乙酸雙氧鈾)常用于蛋白質(zhì)的染色,對一些病毒樣品負染色效果也較好,但由于醋酸鈾pH(4.5)比較低,不適于在該pH(4.5)下不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)染色,同時醋酸鈾與磷酸鹽易形成結(jié)晶,因此可能影響染色效果,可以多清洗幾次。
question
6、生物電鏡樣本的取樣建議?
取材是電鏡實驗的第一步,其操作成功與否直接關(guān)系到電鏡結(jié)果的效果及成敗。為了得到好的結(jié)果,請務(wù)必按要求做好取材!取材基本要點:快(1min)、冷(4℃)、小(1 mm3)、凈(無雜質(zhì))、準(zhǔn)(部位準(zhǔn)確)。不同的樣品,取材細節(jié)上有很大區(qū)別!取材部位準(zhǔn)確,且注意觀察組織的方向性和定位。動作輕巧,器械鋒利,避免對組織的擠壓和推拉,建議用鋒利的手術(shù)刀片、手術(shù)剪刀。
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